ELISA試劑盒應(yīng)嚴(yán)格遵照規(guī)定操作，必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。首先應(yīng)選取的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。所以ELISA試劑盒的購(gòu)買，試劑質(zhì)量的保證以及實(shí)驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)儀器的檢察都是很重要的。
一、標(biāo)本的采集及保存
1、血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4、樣本處理：血清或血漿標(biāo)本推薦稀釋10,000倍。
注：以上標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存，-20℃不應(yīng)超過(guò)1個(gè)月，-80℃不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月；標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
二、試劑的準(zhǔn)備
按試劑盒說(shuō)明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑. ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的.自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正.從冰箱中取出的試 驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用.試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
三、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
四、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
五、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
六、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
七、測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
講述完了以上ELISA實(shí)驗(yàn)的操作要點(diǎn)，可以發(fā)現(xiàn)其實(shí)很多步驟都并不復(fù)雜，重要的是操作的時(shí)候一定要注重細(xì)節(jié)，熟能生巧，才可以掌握ELISA實(shí)驗(yàn)的精髓所在。
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