三月份東南大學(xué)張同學(xué)在我司購(gòu)買了小鼠干擾素系列試劑盒。他自我介紹是實(shí)驗(yàn)新手,之前沒有做過(guò)ELISA等相關(guān)實(shí)驗(yàn)。根據(jù)我司試劑盒提供的說(shuō)明書操作2加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。咨詢怎樣確定合適血清的稀釋梯度?
我司根據(jù)張同學(xué)沒有做過(guò)相關(guān)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)特此給客戶去提供了詳細(xì)的技術(shù)指導(dǎo)并通過(guò)我司銷售給以客戶文字答復(fù)。
現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室普遍采用方陣滴定法。即取不同的抗原抗體梯度做交叉實(shí)驗(yàn),比如橫向包被抗原,豎向就用不同濃度抗體??乖瓭舛确秶梢詮?00ng/孔開始逐步稀釋,抗體的開始稀釋倍數(shù)則要參考生產(chǎn)商的使用說(shuō)明書. 血清用1%BSA稀釋,如果血清效價(jià)高,可以稀釋20000倍測(cè)定,一般都會(huì)做多個(gè)梯度,如稀釋1000,2000,4000,8000,16000倍。
恒遠(yuǎn)預(yù)祝張老師實(shí)驗(yàn)成功!