1. 血清必須貯存于–20 ~ -70℃,若存放于4℃,請勿超過一個月。如果一次無法用完一 瓶,可將40~45 ml分裝于無菌50 ml 離心管中,由于血清結(jié)凍時體積會增加約10 %, 必須預(yù)留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。
2. 一般廠商提供之血清為無菌,不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,勿直接過濾血清。
3. 瓶裝(500ml) 血清解凍步驟(逐步解凍法): -20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室溫下全溶后再分裝,一般以50 ml 無菌離心管可分裝40~45 ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。
4. heat-inactivation 是指56℃, 30 分鐘加熱已*解凍之血清。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理之目的是使血清中之補體成份(complement) 去活化。除非必須,一般不建議作此熱處理,因為會造成沈淀物之顯著增多,且會影響血清之品質(zhì)。補體參與之反應(yīng)有:cytolytic activities, contraction of smooth muscle, release of histamine from mast cells and plaets, enhanced phagocytosis, chemotaxis and activation of lymphocytic and macrophage cell type。
5. 勿將血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,ELISA試劑盒血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞,而影響血清之品質(zhì)。