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ELISA 試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制選擇什么方程去擬合？做校準(zhǔn)曲線時(shí)，曲線擬合類型是選擇線性還是二次方程（曲線），二者哪一個(gè)更？這兩個(gè)問題幾乎是剛開始接觸所有做ELISA實(shí)驗(yàn)的新手必問的問題。因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)曲線做的好與壞會(huì)直接影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，甚至是關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗。恒遠(yuǎn)技術(shù)為您總結(jié)以下要點(diǎn)：
在S曲線的低濃度部門可以用乘冪方程很好的擬合，中低濃度部門可以用直線方程，中間部門可用對數(shù)方程，而中后段可用四參數(shù)。免疫檢測時(shí)尺度點(diǎn)（可以是倍比稀釋的，也可以不是）濃度假如和相應(yīng)的吸光度（OD）值假如能夠呈現(xiàn)直線關(guān)系當(dāng)然是的了，這時(shí)可以通過EXELL等利便的獲得擬合曲線，進(jìn)而推算出樣品的濃度值。
關(guān)于尺度曲線的擬合方式，直線、二次曲線、三次曲線、指數(shù)、對數(shù)等雖都可用于ELISA及其它生物學(xué)反應(yīng)中的曲線擬合，但都只合用于曲線的一部門，有的合用于前半段，有的合用于后半段，有的合用于中間一段，而Logistic曲線則對曲線的全部都有較好的合用性。在一個(gè)長的區(qū)間內(nèi)，Logistic應(yīng)該都能擬合得較為理想。假如用來定量，S形曲線的中間段（較陡處）是比較好的，而兩真?zhèn)€平坦部門計(jì)算誤差會(huì)大，有時(shí)甚至?xí)艽?。用于免疫檢測的所謂“尺度曲線"實(shí)在稱為擬合曲線比較合適。目前上zui流行的免疫檢測擬合方式是“四參數(shù)邏輯擬合"，用這種擬合方式往往能夠比較的反映濃度和吸光度的曲線關(guān)系，從而進(jìn)一步比較準(zhǔn)確的獲得樣品中待測物質(zhì)的濃度值。但我們做免疫檢測很少有時(shí)候能夠有這么理想的情況，標(biāo)品濃度和相應(yīng)OD值往往是"S"型的曲線關(guān)系，這時(shí)就不能用直線擬合的方式了，而對擬合方法進(jìn)行選擇就是必要的了。樞紐在于你的尺度曲線做到了S形的哪一部門，你想檢測的樣品濃度在曲線的哪一部門。人ELISA試劑盒當(dāng)然，假如用于定量，仍是在中間一段較好。但建模型是一回事，而用它來定量是另一回事。這些方法固然沒有一種方法可以通用，但也都可以用。但并不是說它就是的。事實(shí)上不僅是ELISA，其它良多生物學(xué)反應(yīng)都是S形曲線，也都可以用Logistic曲線擬合。